支原體清除劑的一般使用

支原體去除劑在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用雖能有效清除污染，但其對(duì)細(xì)胞本身的影響仍需謹(jǐn)慎評(píng)估。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，部分抗生素類(lèi)去除劑會(huì)干擾細(xì)胞代謝周期——例如濃度超過(guò)5μg/mL的喹諾酮類(lèi)藥物可使HEK293細(xì)胞的增殖速率降低37%，這種抑制作用往往在停藥后仍持續(xù)2-3代。更值得關(guān)注的是，某些含表面活性劑的化學(xué)清除劑會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜表面蛋白的暫時(shí)性脫落，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CD44和整合素β1的表達(dá)量在處理后24小時(shí)內(nèi)下降約40%。

支原體(mycoplasma)，又稱(chēng)霉形體，為目前發(fā)現(xiàn)的最小的最簡(jiǎn)單的原核生

支原體清除試劑(Mycoplasma Removal Agent，MRA)是一種用于抑制和清除在培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)程中廣泛存在的支原體污染的試劑，亦可稱(chēng)為支原體去除劑。MRA既可以用于去除細(xì)胞中已有的支原體污染，也可以用于防止支原體污染。MRA的具體工作濃度因支原體的種類(lèi)不同而有所不同，在實(shí)際清除或防止支原體污染時(shí)，可使用試劑供應(yīng)商推薦的工作濃度，也可以自行測(cè)試獲取適當(dāng)?shù)墓ぷ鳚舛?。在?shí)驗(yàn)前，應(yīng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類(lèi)型等進(jìn)行優(yōu)化，確定**條件。

支原體清除劑的一般使用方法：

1、將推薦濃度的支原體清除劑添加到被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)物中，并至少培養(yǎng)1周；

2、若推薦濃度對(duì)去除支原體無(wú)效，可嘗試提高工作濃度；

3、對(duì)于培養(yǎng)基更換或培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移(傳代)，使用含有相同濃度支原體清除劑的培養(yǎng)基；

4、在不使用支原體清除劑的情況下轉(zhuǎn)移細(xì)胞培養(yǎng)物數(shù)次，并確認(rèn)污染支原體沒(méi)有再生。

為平衡清除效率與細(xì)胞活性，建議采用梯度處理策略。首日使用治療濃度（如2μg/mL普那霉素）沖擊處理6小時(shí)，后續(xù)3天改用0.5μg/mL維持濃度。這種方案在保持85%以上清除率的同時(shí)，能將細(xì)胞凋亡率控制在15%以內(nèi)。值得注意的是，原代細(xì)胞對(duì)去除劑更為敏感，在處理人間充質(zhì)干細(xì)胞時(shí)，建議將暴露時(shí)間縮短至常規(guī)細(xì)胞系的1/3。